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培養基如何配置

發布時間: 2022-01-27 18:57:07

❶ 配製培養基的流程

不是啊用靈敏度為0.1mg的天平稱取葯品.
(2) 往燒杯加入適量蒸餾水或無菌水.
(3) 將葯品放入燒杯內,並用玻璃棒攪拌使其溶解,難溶時可適當加溫以加速溶解.
(4) 要待一種葯品完全溶解後再加入下一種葯品.
(5) 所加入的葯品應依次加入,直至葯品全部加入溶解為止。 例MS母液的配製
按MS培養基成分表,將各種化學物質歸成幾大類,分別為大量元素、微量元素、鐵鹽、有機物。 大量元素10倍液(mg/L)微量元素1000倍液(mg/L)有機物100倍液(mg/L)鐵鹽NH4NO3 1,6500
KNO3 1,9000
CaCl2?2H2O 4,400
MgSO4?7H2O 3,700
KH2PO4 1,700HBO3 6,200
MnSO4?4H2O 22,300
ZnSO4?7H2O 8,600
KI 830
Na2MoO4?2H2O 250
CuSO4?5H2O 25
CoCl2?6H2O 25甘氨酸 200
肌醇 10,000
煙酸 50
維生素B6 50
維生素B1 405.57g FeS04?7H2O和7.45g Na2一EDTA溶於1升蒸餾水裡,用時每配1升MS培養基取5ml。取燒杯注入約600ml蒸餾水,按順序加入葯品並使其溶解,最後加蒸餾水定容至1000ml。取燒杯注入約600ml蒸餾水,按順序加入葯品並使其溶解,最後加蒸餾水定容至1000ml。 2. 培養基制備
配製流程見圖1-2,其順序是:
① 取燒杯或三角瓶注入一定量的蒸餾水,將各種母液按所需容積分別用移液管吸取並混合在一起,然後按要求加入一定量的激素、蔗糖後定容至一定體積。
② 用1mol/L的NaOH或HCl調節pH
③ 如制固體培養基,則加入1%左右的瓊脂後加熱煮沸,使其熔化。
④ 分裝,可用漏斗將液狀培養基注入培養瓶,注入量視培養瓶容量大小而定,通常為容器的1/5左右。
⑤ 封瓶口。
⑥ 高壓蒸汽滅菌。120℃,1.5Mpa,消毒15~20min。注意壓力不能太大,時間也不宜過長,否則蔗糖、有機物特別是維生素類物質會在高溫下分解,影響培養基的酸鹼度,瓊脂也會分解,顏色變深且不易凝固。
⑦ 滅菌後的培養基可放入接種室內靜置,讓其降溫後凝固,如需斜面可將其斜放。

❷ 此培養基如何配置

以配製一升培養基為例: 應該在950 ml去離子水中加入: 胰蛋白腖10g 酵母提取物5g nacl 10g 搖動容器直至溶質溶解。用5mol/lnaoh調ph至7.0,用去離子水定容至1l。在15psi高壓下蒸汽滅菌21min。 (2)培養基如何配置擴展閱讀: 配置原則: 1、選擇適宜的營養物質 就微生物主要類型而言,有細菌、放線菌、酵母菌、黴菌、原生動物、藻類及病毒之分,培養它們所需的培養基各不相同。 在實驗室中常用牛肉膏蛋白腖培養基(或簡稱普通肉湯培養基)培養細菌,用高氏i號合成培養基培養放線菌,培養酵母菌一般用麥芽汁培養基,培養黴菌則一般用查氏合成培養基。 2、營養物質濃度及配比合適 培養基中營養物質濃度合適時微生物才能生長良好,營養物質濃度過低時不能滿足微生物正常生長所需,濃度過高時則可能對微生物生長起抑製作用。 另外,培養基中各營養物質之間的濃度配比也直接影響微生物的生長繁殖和(或)代謝產物的形成和積累,其中碳氮比(c/n)的影響較大。嚴格地講,碳氮比指培養基中碳元素與氮元素的物質的量比值,有時也指培養基中還原糖與粗蛋白之比。 3、控制ph條件 培養基的ph必須控制在一定的范圍內,以滿足不同類型微生物的生長繁殖或產生代謝產物。各類微生物生長繁殖或產生代謝產物的最適ph條件各不相同,一般來講,細菌與放線菌適於在ph7-7.5范圍內生長,酵母菌和黴菌通常在ph4.5-6范圍內生長。 值得注意的是,在微生物生長繁殖和代謝過程中,由於營養物質被分解利用和代謝產物的形成與積累,會導致培養基ph發生變化,若不對培養基ph條件進行控制,往往導致微生物生長速度下降或(和)代謝產物產量下降。 4、控制氧化還原電位(redox potential) 不同類型微生物生長對氧化還原電位(f)的要求不一樣,一般好氧性微生物在f值為+0.1v以上時可正常生長,一般以+0.3一+0.4v為宜,厭氧性微生物只能在f值低於+0.1v條件下生長,兼性厭氧微生物在f值為+0.1v以上時進行好氧呼吸,在+0.1v以下時進行發酵。 5、原料來源的選擇 在配製培養基時應盡量利用廉價且易於獲得的原料作為培養基成分,特別是在發酵工業中,培養基用量很大,利用低成本的原料更體現出其經濟價值。 6、滅菌處理 要獲得微生物純培養,必須避免雜菌污染,因此對所用器材及工作場所進行消毒與滅菌。對培養基而言,更是要進行嚴格的滅菌。對培養基一般採取高壓蒸汽滅菌,一般培養基用1.05kg/cm2,121.3℃條件下維持15-30min可達到滅菌目的。 在配製培養基過程中,泡沫的存在對滅菌處理極不利,因為泡沫中的空氣形成隔熱層,使泡沫中微生物難以被殺死。因而有時需要在培養基中加入消泡沫劑以減少泡沫的產生,或適當提高滅菌溫度。

❸ 培養基怎麼在家配置

在家裡配製土豆瓊脂培養基:土豆,明膠,煮沸,然後密封,在鍋上蒸兩個小時可以達到滅菌的目的,而後取出即可備用。

❹ 配置培養基的原則有哪些

配置培養基的原則有:

1、選擇適宜的營養物質:

所有微生物生長繁殖均需要培養基含有碳源、氮源、無機鹽、生長因子、水及能源,但由於微生物營養類型復雜,不同微生物對營養物質的需求是不一樣的,因此首先要根據不同微生物的營養需求配製針對性強的培養基。

2、營養物質濃度及配比合適:

培養基中營養物質濃度合適時微生物才能生長良好,營養物質濃度過低時不能滿足微生物正常生長所需,濃度過高時則可能對微生物生長起抑製作用。

3、控制pH條件:

培養基的pH必須控制在一定的范圍內,以滿足不同類型微生物的生長繁殖或產生代謝產物。各類微生物生長繁殖或產生代謝產物的最適pH條件各不相同,一般來講,細菌與放線菌適於在pH7-7.5范圍內生長,酵母菌和黴菌通常在pH4.5-6范圍內生長。

4、控制氧化還原電位:

不同類型微生物生長對氧化還原電位(F)的要求不一樣,一般好氧性微生物在F值為+0.1V以上時可正常生長,一般以+0.3一+0.4V為宜,厭氧性微生物只能在F值低於+0.1V條件下生長,兼性厭氧微生物在F值為+0.1V以上時進行好氧呼吸,在+0.1V以下時進行發酵。

5、原料來源的選擇:

在配製培養基時應盡量利用廉價且易於獲得的原料作為培養基成分,特別是在發酵工業中,培養基用量很大,利用低成本的原料更體現出其經濟價值。

6、滅菌處理:

要獲得微生物純培養,必須避免雜菌污染,因此對所用器材及工作場所進行消毒與滅菌。對培養基而言,更是要進行嚴格的滅菌。

(4)培養基如何配置擴展閱讀:

液體培養基:80%~90%是水,其中配有可溶性的或不溶性的營養成分的培養基。

固體培養基:一類配製成的固體狀態的基質。根據性質又分為固化培養基、非可逆性固化培養基、天然固態培養基、濾膜。

半固體培養基:指在液體培養基中加入少量的凝固劑而配製成的半固體狀態的培養基。

脫水培養基:又稱預制乾燥培養基,指含有除水分外的一切成分的商品培養基。

特殊培養基:

1、選擇性培養基:選擇性培養基是指根據某種微生物的特殊營養要求或其對某化學、物理因素的抗性而設計的培養基。其功能是使混合菌樣中的劣勢菌變成優勢菌,從而提高該菌的篩選效率。

2、酵母菌富集培養基:葡萄糖5%,尿素0.1%,硫化銨0.1%,磷酸二氫鉀0.25%,磷酸氫二鈉0.05%,七水合硫酸鎂0.1%,七水合硫酸鐵0.01%,酵母膏0.05%,孟加拉紅0.003%,pH4.5。

3、Ashby無氮培養基:富集好氧自生固氮菌,甘露醇1%,磷酸二氫鉀0.02%,七水合硫酸鎂0.02%,氯化鈉0.02%,二水合硫酸鈣0.01%,碳酸鈣0.5%。

培養基在使用前通過高壓或過濾滅菌。防止污染應該注意以下事項:

1、確認工作細胞庫是否被污染,確認毒種工作種子批是否被污染,確認所用培養基及其添加成分是否被污染,均可用細菌、真菌及支原體無菌試驗來確認並排除。同時要對無菌試驗培養基的靈敏度進行驗證。實際生產中,可以從配製好的培養液中取少量加入營養瓊脂於恆溫培養箱內培養,48小時即可觀察有無污染。

2、其它:高壓滅菌設備、過濾除菌設備均應進行驗證,確保滅菌和除菌效果;前者應在投產前及其後的每6個月進行驗證,後者應在每次除菌前、後進行驗證工作(至少應在除菌後進行一次)。

3、另外,應將有毒區與無毒區嚴格分開,並有各自獨立的空氣凈化系統及孵室,有毒區對無毒區應保持相對負壓,防止病毒對培養細胞(尤其是細胞庫)的污染。

❺ 培養基要怎樣配製

配製培養基前,要洗凈備齊以下器具,主要包括不同型號的燒杯、容量瓶、移液管、滴管、玻棒、三角瓶以及培養基分裝器等。

用於配製培養基的水最好是蒸餾水或無離子水,精細的試驗須用重蒸餾水。化學葯品應採用分析純AR(二級)或化學純CP(三級),以免雜質對培養物造成不利影響。葯品的稱量及定容要准確,不同化學葯品的稱量需使用不同的葯匙,避免葯品的交叉污染與混雜。

❻ 培養基怎麼配置

(1)配製母液。把培養基m的必需元素按原配方量的50倍/100倍或1000倍稱量後製成一種濃溶液,這種濃溶液叫母液在配製培養基時按比例分別量取母液稀釋到所需的濃度即可母液配好後貼上標簽,放在0~4℃的冰箱中可使用半年到1年,這樣傲可節省許多時間可能產生化學反應的或溶解後產生沉澱的不能放在同一個容器m配製母液要用重蒸餾水葯物要使用分析純或等級較高的化學純葯物的稱量和葯液的定容都要准確。

母液①:硫酸鎂18.5克.硝酸銨82.5克.硝酸鉀95.0克;加水定容到1000毫升,濃度為培養基的50倍,配1升培養基時量取20毫升母液

母液②:氯化鈣22.0克加水定容到500毫升,濃度為培養基的100倍,配1升培養基時量取10毫升母液

母液③:磷酸二氫鉀8.5克加水定容到500毫升,濃度為培養基的100倍,配1升培養基時量取10毫升母液。

母液④;乙二胺四乙酸二鈉3.73克硫酸亞鐵2.78克,加水定容到1000毫升,濃度為培養基的100倍,配1升培養基時量取10毫升母液

母液⑤:硼酸620毫克,硫酸錳2230毫克,硫酸鋅860毫克,硫酸銅2.5毫克,碘化鉀83毫克,鉬酸鈉25毫克,氯化鈷2.5毫克,加水定容到1000毫升,濃度為培養基的100信,配1升培養基時量取10毫升母液。

母液⑥:肌醇5克,甘氨酸100毫克,煙酸25毫克,鹽酸吡哆醇25毫克,鹽酸硫胺素5毫克,加水定容到500毫升,濃度為培養基的100倍,配1升培養基時量取10毫升母液

(2)配製培養基。配製每1000毫升培養基.稱取6~10克瓊:脂作凝固劑,具體按配方要求稱量,放在水浴鍋上慢慢溶解,先在量筒內放入一定量的水,按照母液順序和規定量,量取母液,當母液加完後,根據需要每升培養基再加入生長調節物質如吲哚乙酸或萘乙酸等,細胞分裂素類0.04~10毫克,細胞分裂素應用最多的是6-苄基腺嘌呤,加完後倒入已熔化的瓊脂中,每1000毫升培養基加入蔗糖30克或根據要求確定,定容到所需的體積,繼續加溫,直到瓊脂完全熔解,用鹽酸或氫氧化鈉對培養基的pH進行調節,多數培養基的pH在5.4~6.0,MS培養基的pH為5.7。

將配好的培養基趁熱倒入培養容器中,培養基占容器體積的1/4~1/3不要將培養基沾到容器壁上,否則容易被雜菌感染,然後及時加蓋,進行高壓滅菌,滅菌時要按高壓滅菌鍋的操作規程使用.在121℃、壓力111千帕下維持15~20分鍾,溫度和時間都要嚴格控制,到時間後立即切斷電源,當高壓鍋內壓力降到常壓後,開啟放氣閥,打開鍋蓋,取出滅菌好的培養基,放在接種室中培養3天,沒被感染後才能用來組織培養

❼ 培養基的配製是怎麼樣的

1.培養基種類及成分

培養基根據其物理性狀大致分成兩類,即固體和液體培養基。在培養基中加入一定量的凝固劑(如瓊脂、明膠等)即為固體培養基,而不加入凝固劑的即為液體培養基,具體運用上應視培養目的要求不同分別選擇採用。

無論是固體還是液體培養基,其基本成分是類似的,一般可大致分為兩個部分,即基本培養基如MS、B5、N6、Nitsh等和附加成分,如激素和天然附加物等,其基本成分如表1、表2。

表2 幾種培養基附加成分表

2.培養基的配製

(1)母液的配製與保存 由於培養不同植物,需要配製不同的培養基。為了減少工作量,可先把葯品配成母液(即濃縮液),一般擴大10~100倍,其中大量元素倍數略低,一般為10~20倍,微量元素和有機成分及鐵鹽等可擴大50~100倍。母液的配製及保存應注意以下幾個方面:①葯品稱量應精確,尤其微量元素化合物應精確至0.0001克,大量元素化合物可精確至0.01克。②配製母液的濃度適當,倍數不宜過大,一是長時間保存後易沉澱,二是濃度大,用量就少,在配製培養基時易影響精確度。③母液貯藏也不宜過長,一般幾個月左右,在配好的母液容器上應註明配製日期,以便定期檢查,如出現渾濁、沉澱及黴菌等現象,就不能使用。④母液應在2~4℃的冰箱內保存。

(2)培養基的配製 首先要根據培養基配方,算好母液吸取量,並按順序吸取,然後加入蔗糖溶液,並加入蒸餾水定容至所需體積,並用0.1~1摩爾/升的鹽酸或氫氧化鈉調整pH,加入瓊脂加熱溶化,配製好的培養基要趁熱分注,倒入試管、三角瓶等培養器皿中,一般至容器1/4~1/5左右,最後加塞或封口准備消毒。

(3)培養基的消毒 由於培養基內有豐富營養物質,極利於細菌和真菌繁殖,造成污染,影響組培的成功,因此培養基消毒是必不可少的一個環節。一般採用高溫高壓消毒和過濾消毒兩種方法。

高溫高壓消毒:一般用消毒鍋消毒,把裝有培養基的培養器皿先放入消毒簍中,再放入加有水的消毒鍋內,注意容器不能裝得過滿,以免影響鍋內蒸汽循環。裝好後將鍋蓋擰緊,加熱,並打開放氣閥,待水煮沸後,放氣3~5分鍾排出鍋內冷空氣,即可關上放氣閥並繼續加熱,使鍋內保持108千帕壓力、溫度120℃左右,大約15~20分鍾即可。

過濾消毒:一些易受高溫破壞的培養基成分如引哚乙酸(IAA)、引哚丁酸(IBA)、玉米素(ZT)等,不宜用高溫高壓法消毒,則可用過濾消毒後加入至高溫高壓消毒的培養基中,過濾消毒可用細菌過濾消毒器,通過其中的0.45微米孔徑的濾膜將直徑較大的細菌等濾去,過濾消毒應在無菌室或超凈工作台上進行,以避免污染培養基。

❽ 培養基的配製

1.配料:

配方換算→在容器中加入少量水(蒸餾水,自然水)→按照配方稱取各種葯品(依次加入)→加足所需水量。

2.溶解:

澱粉溶解:少量冷水調成糊狀。加熱溶解,邊加熱邊攪拌以防止燒焦。

3.調PH:

用1N的鹽酸或1N的NaOH把培養基調節到所要求的值。

4.過濾:

濾紙或棉花進行過濾。

5.分裝:

一般培養基放在三角瓶或試管中滅菌使用。

6.包紮:

分裝好後,塞上棉塞,在用牛皮紙將棉塞包裹好,防止滅菌時水份進入把棉塞弄濕。

7.滅菌:

按配方上要求的溫度、壓力進行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高,營養成分會被破壞。

8.貯存:

培養基在30℃下放置一天,無污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放於2-8℃冰箱中備用。


(8)培養基如何配置擴展閱讀

培養基在使用前通過高壓或過濾滅菌。防止污染應該注意以下事項:

確認工作細胞庫是否被污染,確認毒種工作種子批是否被污染,確認所用培養基及其添加成分是否被污染,均可用細菌、真菌及支原體無菌試驗來確認並排除。

同時要對無菌試驗培養基的靈敏度進行驗證。實際生產中,可以從配製好的培養液中取少量加入營養瓊脂於恆溫培養箱內培養,48小時即可觀察有無污染。

將有毒區與無毒區嚴格分開,並有各自獨立的空氣凈化系統及孵室,有毒區對無毒區應保持相對負壓,防止病毒對培養細胞(尤其是細胞庫)的污染。

參考資料

培養基-網路

❾ 配置培養基的原則有哪些

還是很多的。
培養基配製應遵循的原則
1、 根據不同微生物的營養需要配製不同的培養基。
2、 注意各種營養物質的濃度及合適配比,保持合適滲透壓 。
3、 將培養基的 pH 控制在適宜的范圍之內,以利於不同類型微生物的生長繁殖或代謝產物的積累。
4、 經濟節約的原則。在所選培養基成分能滿足微生物培養要求的前提下,盡可能選用價格低廉,資源豐富的材料作培養基成分。
5、控制氧化還原電位。對厭氧的微生物尤其重要。
6、培養基應無菌。故在培養基配製後應徹底殺死培養基中的雜菌 。

❿ 配置培養基的基本步驟有哪些應注意什麼問題

快速製作斜面培養基方法
製作培養基斜面是制備菌種不可缺少的一步,傳統的方法是將試管每10支為一組紮成一捆,高壓滅菌後,一支一支地擺成斜面,操作比較煩瑣,佔用面積又多,造成諸多不便。我們在實踐中摸索出一種簡捷快速制備斜面培養基的方法,現介紹如下:
1.將膠合板截成長18厘米(與試管長度相等或略短)、寬9厘米(比並排5支試管直徑的總和略窄)的小塊備用。
2.在並排5支試管上面平置截好的膠合板,再在膠合板上面並排放5支試管,然後將試管的上、下端分別用牛皮紙包好,用線扎緊,使膠合板兩側的試管保持平行,置高壓鍋中滅菌。
3.高壓滅菌後,經自然冷卻,待氣壓降至零時,將高壓鍋的鍋蓋打開點,當棉塞水分充分蒸發後取出,不用拆捆,直接擺成斜面。大量制斜面時,既快捷又很少佔用空間,非常方便,還便於保溫,減緩凝結速度,充分吸收游離水分。
4.如需將斜面培養基保存一段時間,可在滅菌前將聚丙烯塑料袋套在試管外並扎緊袋口,滅菌後取出,直接擺成斜面,可防止水分蒸發。
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摘自於2003年第7期《農村實用科技》