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凝膠配置用什麼

發布時間: 2023-08-10 11:39:03

① 瓊脂糖凝膠的配製

稱量、溶膠、倒膠、拔梳。
配置步驟如下:
1、稱量,小膠板0.8%的膠需要瓊脂粉0.104gTBE13mL。
2、熔膠,將所稱量的瓊脂粉與TBE在錐形瓶中混合,在微波爐內反復加熱2到3次至瓊脂粉溶解並無氣泡。
3、倒膠,干凈的膠槽內擺好梳子,往膠內滴加1uL左右核酸染料,混勻,待冷卻至不燙手,輕輕倒入膠板內。
4、拔梳待大約2分鍾即可。

② SDS-PAGE凝膠制實驗及其各實驗試劑的配製方法

SDS-PAGE凝膠制備屬於實驗室最常規的操作了,剛開始做蛋白實驗總是在找凝膠配製實驗中所用試劑的配方,這里總結了分離膠、濃縮膠、分離膠和濃縮膠緩沖液、考馬斯亮藍染液、樣品緩沖液、電泳緩沖液等配方。
1.
分離膠(12%)
配製

所需試劑

所需體積

分離膠(12%)

30%丙烯醯胺

6.0
ml

1.5
mol/l
Tris-HCl

3.8
ml

10%SDS

150
μl

10%過硫酸銨

150
μl

TEMED

6
μl

蒸餾水

4.9
ml

2.
濃縮膠(5%)
配製

所需試劑

所需體積

濃縮膠(5%)

30%丙烯醯胺

1.3
ml

1.5
mol/l
Tris-HCl

1.0
ml

10%SDS

80
μl

10%過硫酸銨

80
μl

TEMED

8
μl

蒸餾水

5.5
ml

3.
分離膠緩沖液(pH8.9)
配製

所需試劑

所需體積

分離膠緩沖液

Tris

36.6
g

1
mol/l
HCl

48
ml

蒸餾水

補足至100
ml

4.
濃縮膠緩沖液(pH6.7)
配製

所需試劑

所需體積

濃縮膠緩沖液(pH6.7)

Tris

5.98
g

1
mol/l
HCl

48
ml

蒸餾水

補足至100
ml

5.
30%丙烯醯胺(pH≤7.0)
配製

所需試劑

所需體積

30%丙烯醯胺(pH≤7.0)

丙烯醯胺

29
g

甲叉-雙丙烯醯胺

1
g

蒸餾水

補足至100
ml

6.
10%過硫酸銨(W/V):1g過硫酸銨溶於10ml水中,4℃保存數周,盡量現用現配。
7.
10%SDS:將10
g
SDS溶於80ml重蒸水中並輕緩攪拌(室溫低時需水浴加熱溶解),再定容至100ml,室溫存放。
8.
樣品緩沖液
配製

所需試劑

所需體積

樣品緩沖液

1
M
Tris-HCl(pH6.7)

5
ml

SDS

2.5
g

巰基乙醇

1
ml

溴酚蘭

0.05
g

蔗糖

10
g

蒸餾水

補足至100ml

9.
考馬斯亮藍染色液:0.25g考馬斯亮藍R-250用少量甲醇溶解後,用甲醇(40ml)-乙酸(10ml)水溶液稀釋至100ml。
10.
Tris-甘氨酸電泳緩沖液(pH8.3)
配製

所需試劑

所需體積

Tris-甘氨酸
電泳緩沖液(pH8.3)

Tris鹼

15.1
g

甘氨酸

94
g

10%(W/V)SDS

50
ml

去離子水

補足至100
ml

凝膠配製所需試劑的母液不能放置太久,有條件的實驗室可將母液保存在4度冰箱中,放置母液被微生物污染或者出現沉澱。