① 提DNA用的1%SDS-PK(蛋白酶K)如何配置
50MMOL/L TRIS-CL(PH8.0)和1.5MMOL/L乙酸鈣,高壓滅菌後,該混合溶液配製成含蛋白酶K濃度為20MG/ML的溶液,將配製的蛋白酶K溶液-20度保存.
② 大概配成多少mg/ml的,蛋白酶K也是粉末狀的,怎麼配呢
一般先低速離心將粉末甩在管底部 加入2.5mL去離子水濃度就是20mg/ml,具體濃度看你的實驗要求,操作時戴口罩 對皮膚黏膜有損傷,希望對你有幫組。
③ 蛋白酶k的保存方法
保存:保存在-20℃冰箱里,避免反復凍融,有效保證12月。
孵育溫度為55至65℃,理想孵育溫度為58℃,孵育時間為15分鍾至48小時;理想孵育時間為2小時。
④ 蛋白酶k是從哪裡得到的
蛋白酶k是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶,從林伯氏白色念球菌中純化得到。該酶有兩個Ca2+結合位點,它們離酶的活性中心有一定距離,與催化機理並無直接關系。然而,如果從該酶中除去Ca2+,由於出現遠程的結構變化,催化活性將喪失80%左右,但其剩餘活性通常已足以降解在一般情況下污染酶製品的蛋白質。所以,蛋白酶k消化過程中通常加入edta(以抑制依賴於mg2+的核酸酶的作用)。但是,如果要消化對蛋白酶k具有較強耐性的蛋白,如角蛋白一類,則可能需要使用含有1mmol/lCa2+而不含edta的緩沖液。在消化完畢後、純化核酸前要加入egt(ph8.0)至終濃度為2mmol/l,以鰲合Ca2+。
⑤ 蛋白酶K 600mAU/ml 怎麼配
AU是活力單位,這個和100mg之間沒有直接聯系,但是產品說明書上應該是寫出來每毫克蛋白有多少活力單位,否則是沒法配製的。
⑥ 我做的TUNEL,說明書上說是要20ug/ml的蛋白酶k,我買來的蛋白酶K是20mg/ml的不知道怎麼稀釋
1mg=1000ug,這個濃度不用稀釋了,用的時候1ml反應體系中加1ul就可以了,終濃度為20ug/ml。蛋白酶k分不分裝應該都可以,因為保存溫度是-20℃,是液態的,用的時候不需要融解,所以直接拿出來用就可以了。保存時間應該挺長的,具體看說明書。good luck!
⑦ 蛋白酶K溶液怎麼配製
蛋白酶K溶液怎麼配製
蛋白酶,顧名思義,降解蛋白的酶,是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵,用於生物樣品中蛋白質的一般降解。 在RNA提取中,蛋白酶k的作用主要是降解RNA酶,防止RNA的降解。
蛋白酶K廣泛應用於分子生物學,葯理學等科研方面。一種非特異性、枯草桿菌蛋白酶相關的絲氨酸蛋白酶,具有很高的比活性。一般儲存在-20°C,避光防潮密閉乾燥 蛋白酶是所有能夠催化分解蛋白質的酶類的統稱
⑧ 蛋白酶k、胰蛋白酶水解蛋白質方法步驟
沒步奏