1. 製作濃縮膠和分離膠時可能會出現不凝固的現象,通常原因有
摘要 ，因為 濃縮膠的ACRBIS 的量明顯少於分離膠，出現膠不凝的現象個人 認為可能有幾種可能：
2. 電泳濃縮膠濃度怎麼選取
濃縮膠一般都是5%的，下面的是5ML的配方，其餘的你可以自己算了
5ml
H2O 3.6
acrylamide mix（30%） 0.62
1M Tris(PH6.8) 0.63
10% SDS 0.05
10% AP 0.05
TEMED 0.005
3. 濃縮膠的配製方法
一般同工酶可選擇7?5%～10%的膠(過氧化物酶和酯酶7?5%較合適，超氧化物歧化酶用10%，可溶性蛋白可根據需要配製)。將配製好的凝膠液置真空乾燥器中，抽氣10Min，再加入TEMED15μl；混勻後用一細玻棒引流，沿無凹槽的玻板緩緩注入膠室中，注膠過程要防止氣泡產生。膠液加到離凹槽3CM處為止，立即用注射器輕輕在膠溶液上面鋪1CM高的水層，但不要擾亂丙烯醯胺膠面。待分離膠和水層之間出現清晰的界面時，表示聚合已完成。用注射器小心吸出上層覆蓋水，按表5－1配製好濃縮膠，抽氣後加入5μlTEMED，混合後加到分離膠上層，插入預先選擇好的樣品梳，注意不要帶入氣泡。
4. SDS-PAGE凝膠制實驗及其各實驗試劑的配製方法
SDS-PAGE凝膠制備屬於實驗室最常規的操作了，剛開始做蛋白實驗總是在找凝膠配製實驗中所用試劑的配方，這里總結了分離膠、濃縮膠、分離膠和濃縮膠緩沖液、考馬斯亮藍染液、樣品緩沖液、電泳緩沖液等配方。
1.
分離膠(12%)
配製
所需試劑
所需體積
分離膠(12％)
30％丙烯醯胺
6.0
ml
1.5
mol/l
Tris-HCl
3.8
ml
10%SDS
150
μl
10%過硫酸銨
150
μl
TEMED
6
μl
蒸餾水
4.9
ml
2.
濃縮膠(5%)
配製
所需試劑
所需體積
濃縮膠(5％)
30％丙烯醯胺
1.3
ml
1.5
mol/l
Tris-HCl
1.0
ml
10%SDS
80
μl
10%過硫酸銨
80
μl
TEMED
8
μl
蒸餾水
5.5
ml
3.
分離膠緩沖液(pH8.9)
配製
所需試劑
所需體積
分離膠緩沖液
Tris
36.6
g
1
mol/l
HCl
48
ml
蒸餾水
補足至100
ml
4.
濃縮膠緩沖液(pH6.7)
配製
所需試劑
所需體積
濃縮膠緩沖液（pH6.7）
Tris
5.98
g
1
mol/l
HCl
48
ml
蒸餾水
補足至100
ml
5.
30%丙烯醯胺(pH≤7.0)
配製
所需試劑
所需體積
30%丙烯醯胺（pH≤7.0）
丙烯醯胺
29
g
甲叉-雙丙烯醯胺
1
g
蒸餾水
補足至100
ml
6.
10%過硫酸銨(W/V)：1g過硫酸銨溶於10ml水中，4℃保存數周，盡量現用現配。
7.
10%SDS：將10
g
SDS溶於80ml重蒸水中並輕緩攪拌(室溫低時需水浴加熱溶解)，再定容至100ml，室溫存放。
8.
樣品緩沖液
配製
所需試劑
所需體積
樣品緩沖液
1
M
Tris-HCl（pH6.7）
5
ml
SDS
2.5
g
巰基乙醇
1
ml
溴酚蘭
0.05
g
蔗糖
10
g
蒸餾水
補足至100ml
9.
考馬斯亮藍染色液：0.25g考馬斯亮藍R-250用少量甲醇溶解後，用甲醇(40ml)-乙酸(10ml)水溶液稀釋至100ml。
10.
Tris-甘氨酸電泳緩沖液(pH8.3)
配製
所需試劑
所需體積
Tris-甘氨酸
電泳緩沖液（pH8.3）
Tris鹼
15.1
g
甘氨酸
94
g
10％（W/V）SDS
50
ml
去離子水
補足至100
ml
凝膠配製所需試劑的母液不能放置太久，有條件的實驗室可將母液保存在4度冰箱中，放置母液被微生物污染或者出現沉澱。
5. 求SDS-PAGE 配方 分離膠 7.5% 濃縮膠 4%
5ml 7.5%分離膠：
H2O 2.35ml
30%丙烯醯胺溶液 1.25ml
1.5M Tris(pH8.8) 1.3ml
10%SDS 50ul
10%APS 50ul
TEMED 4ul
5ml 4%濃縮膠：
H2O 3ml
30%丙烯醯胺溶液 670ul
0.5M Tris(pH6.8) 1.25ml
10%SDS 50ul
10%APS 50ul
TEMED 4ul
6. 4✘tris-sds buffer ph8.8
在SDS－PAGE不連續電泳中,制膠緩沖液使用的是Tris－HCL緩沖系統,濃縮膠是pH6.7,分離膠pH8.9；而電泳緩沖液使用的Tris－甘氨酸緩沖系統.在濃縮膠中,其pH環境呈弱酸性,因此甘氨酸解離很少,其在電場的作用下,泳動效率低；而CL離子卻很高,兩者之間形成導電性較低的區帶,蛋白分子就介於二者之間泳動.由於導電性與電場強度成反比,這一區帶便形成了較高的電壓剃度,壓著蛋白質分子聚集到一起,濃縮為一狹窄的區帶.當樣品進入分離膠後,由於膠中pH的增加,呈鹼性,甘氨酸大量解離,泳動速率增加,直接緊隨氯離子之後,同時由於分離膠孔徑的縮小,在電場的作用下,蛋白分子根據其固有的帶電性和分子大小進行分離.
7. 索萊寶4xsdspage濃縮膠緩沖液怎麼配置
本試劑是由 Tris 和 SDS 混合而成的，主要用於 SDS-PAGE 凝膠（變性聚丙烯醯胺凝膠）制備實驗。配製濃縮膠時，10ml 制膠體系中加入 2.5ml（4 倍稀釋） 。
組分 濃度
Tris-HCl（pH=6.8） 0.5mol/L
SDS 0.4%（W/V）
注意事項：若有白色沉澱析出，可置於 37℃水浴，析出溶解後再使用。
8. 做western blot，怎樣根據分子量的不同配置不同濃度的濃縮膠
10%、12%的分離膠都可以
9. 樣品層在濃縮膠中為什麼能得到濃縮
樣品層在濃縮膠中能得到濃縮是因為：濃縮膠的作用是有堆積作用，凝膠濃度較小，孔徑較大，把較稀的樣品加在濃縮膠上，經過大孔徑凝膠的遷移作用而被濃縮至一個狹窄的區帶。
當樣品液和濃縮膠選pH6.8的TRIS/HCL緩沖液，電極液選TRIS/甘氨酸。電泳開始後，HCL解離成氯離子，甘氨酸解離出少量的甘氨酸根離子。蛋白質帶負電荷，因此一起向正極移動，其中氯離子最快，甘氨酸根離子最慢，蛋白居中。
濃縮叫的配置方式
一般同工酶可選擇7.5%～10%的膠(過氧化物酶和酯酶7.5%較合適，超氧化物歧化酶用10%，可溶性蛋白可根據需要配製)。將配製好的凝膠液置真空乾燥器中，抽氣10Min，再加入TEMED15μl；混勻後用一細玻棒引流，沿無凹槽的玻板緩緩注入膠室中，注膠過程要防止氣泡產生。
膠液加到離凹槽3CM處為止，立即用注射器輕輕在膠溶液上面鋪1CM高的水層，但不要擾亂丙烯醯胺膠面。待分離膠和水層之間出現清晰的界面時，表示聚合已完成。
用注射器小心吸出上層覆蓋水，按表5－1配製好濃縮膠，抽氣後加入5μlTEMED，混合後加到分離膠上層，插入預先選擇好的樣品梳，注意不要帶入氣泡。