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培养基如何配置

发布时间: 2022-01-27 18:57:07

❶ 配制培养基的流程

不是啊用灵敏度为0.1mg的天平称取药品.
(2) 往烧杯加入适量蒸馏水或无菌水.
(3) 将药品放入烧杯内,并用玻璃棒搅拌使其溶解,难溶时可适当加温以加速溶解.
(4) 要待一种药品完全溶解后再加入下一种药品.
(5) 所加入的药品应依次加入,直至药品全部加入溶解为止。 例MS母液的配制
按MS培养基成分表,将各种化学物质归成几大类,分别为大量元素、微量元素、铁盐、有机物。 大量元素10倍液(mg/L)微量元素1000倍液(mg/L)有机物100倍液(mg/L)铁盐NH4NO3 1,6500
KNO3 1,9000
CaCl2?2H2O 4,400
MgSO4?7H2O 3,700
KH2PO4 1,700HBO3 6,200
MnSO4?4H2O 22,300
ZnSO4?7H2O 8,600
KI 830
Na2MoO4?2H2O 250
CuSO4?5H2O 25
CoCl2?6H2O 25甘氨酸 200
肌醇 10,000
烟酸 50
维生素B6 50
维生素B1 405.57g FeS04?7H2O和7.45g Na2一EDTA溶于1升蒸馏水里,用时每配1升MS培养基取5ml。取烧杯注入约600ml蒸馏水,按顺序加入药品并使其溶解,最后加蒸馏水定容至1000ml。取烧杯注入约600ml蒸馏水,按顺序加入药品并使其溶解,最后加蒸馏水定容至1000ml。 2. 培养基制备
配制流程见图1-2,其顺序是:
① 取烧杯或三角瓶注入一定量的蒸馏水,将各种母液按所需容积分别用移液管吸取并混合在一起,然后按要求加入一定量的激素、蔗糖后定容至一定体积。
② 用1mol/L的NaOH或HCl调节pH
③ 如制固体培养基,则加入1%左右的琼脂后加热煮沸,使其熔化。
④ 分装,可用漏斗将液状培养基注入培养瓶,注入量视培养瓶容量大小而定,通常为容器的1/5左右。
⑤ 封瓶口。
⑥ 高压蒸汽灭菌。120℃,1.5Mpa,消毒15~20min。注意压力不能太大,时间也不宜过长,否则蔗糖、有机物特别是维生素类物质会在高温下分解,影响培养基的酸碱度,琼脂也会分解,颜色变深且不易凝固。
⑦ 灭菌后的培养基可放入接种室内静置,让其降温后凝固,如需斜面可将其斜放。

❷ 此培养基如何配置

以配制一升培养基为例: 应该在950 ml去离子水中加入: 胰蛋白胨10g 酵母提取物5g nacl 10g 摇动容器直至溶质溶解。用5mol/lnaoh调ph至7.0,用去离子水定容至1l。在15psi高压下蒸汽灭菌21min。 (2)培养基如何配置扩展阅读: 配置原则: 1、选择适宜的营养物质 就微生物主要类型而言,有细菌、放线菌、酵母菌、霉菌、原生动物、藻类及病毒之分,培养它们所需的培养基各不相同。 在实验室中常用牛肉膏蛋白胨培养基(或简称普通肉汤培养基)培养细菌,用高氏i号合成培养基培养放线菌,培养酵母菌一般用麦芽汁培养基,培养霉菌则一般用查氏合成培养基。 2、营养物质浓度及配比合适 培养基中营养物质浓度合适时微生物才能生长良好,营养物质浓度过低时不能满足微生物正常生长所需,浓度过高时则可能对微生物生长起抑制作用。 另外,培养基中各营养物质之间的浓度配比也直接影响微生物的生长繁殖和(或)代谢产物的形成和积累,其中碳氮比(c/n)的影响较大。严格地讲,碳氮比指培养基中碳元素与氮元素的物质的量比值,有时也指培养基中还原糖与粗蛋白之比。 3、控制ph条件 培养基的ph必须控制在一定的范围内,以满足不同类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。各类微生物生长繁殖或产生代谢产物的最适ph条件各不相同,一般来讲,细菌与放线菌适于在ph7-7.5范围内生长,酵母菌和霉菌通常在ph4.5-6范围内生长。 值得注意的是,在微生物生长繁殖和代谢过程中,由于营养物质被分解利用和代谢产物的形成与积累,会导致培养基ph发生变化,若不对培养基ph条件进行控制,往往导致微生物生长速度下降或(和)代谢产物产量下降。 4、控制氧化还原电位(redox potential) 不同类型微生物生长对氧化还原电位(f)的要求不一样,一般好氧性微生物在f值为+0.1v以上时可正常生长,一般以+0.3一+0.4v为宜,厌氧性微生物只能在f值低于+0.1v条件下生长,兼性厌氧微生物在f值为+0.1v以上时进行好氧呼吸,在+0.1v以下时进行发酵。 5、原料来源的选择 在配制培养基时应尽量利用廉价且易于获得的原料作为培养基成分,特别是在发酵工业中,培养基用量很大,利用低成本的原料更体现出其经济价值。 6、灭菌处理 要获得微生物纯培养,必须避免杂菌污染,因此对所用器材及工作场所进行消毒与灭菌。对培养基而言,更是要进行严格的灭菌。对培养基一般采取高压蒸汽灭菌,一般培养基用1.05kg/cm2,121.3℃条件下维持15-30min可达到灭菌目的。 在配制培养基过程中,泡沫的存在对灭菌处理极不利,因为泡沫中的空气形成隔热层,使泡沫中微生物难以被杀死。因而有时需要在培养基中加入消泡沫剂以减少泡沫的产生,或适当提高灭菌温度。

❸ 培养基怎么在家配置

在家里配制薯仔琼脂培养基:薯仔,明胶,煮沸,然后密封,在锅上蒸两个小时可以达到灭菌的目的,而后取出即可备用。

❹ 配置培养基的原则有哪些

配置培养基的原则有:

1、选择适宜的营养物质:

所有微生物生长繁殖均需要培养基含有碳源、氮源、无机盐、生长因子、水及能源,但由于微生物营养类型复杂,不同微生物对营养物质的需求是不一样的,因此首先要根据不同微生物的营养需求配制针对性强的培养基。

2、营养物质浓度及配比合适:

培养基中营养物质浓度合适时微生物才能生长良好,营养物质浓度过低时不能满足微生物正常生长所需,浓度过高时则可能对微生物生长起抑制作用。

3、控制pH条件:

培养基的pH必须控制在一定的范围内,以满足不同类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。各类微生物生长繁殖或产生代谢产物的最适pH条件各不相同,一般来讲,细菌与放线菌适于在pH7-7.5范围内生长,酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范围内生长。

4、控制氧化还原电位:

不同类型微生物生长对氧化还原电位(F)的要求不一样,一般好氧性微生物在F值为+0.1V以上时可正常生长,一般以+0.3一+0.4V为宜,厌氧性微生物只能在F值低于+0.1V条件下生长,兼性厌氧微生物在F值为+0.1V以上时进行好氧呼吸,在+0.1V以下时进行发酵。

5、原料来源的选择:

在配制培养基时应尽量利用廉价且易于获得的原料作为培养基成分,特别是在发酵工业中,培养基用量很大,利用低成本的原料更体现出其经济价值。

6、灭菌处理:

要获得微生物纯培养,必须避免杂菌污染,因此对所用器材及工作场所进行消毒与灭菌。对培养基而言,更是要进行严格的灭菌。

(4)培养基如何配置扩展阅读:

液体培养基:80%~90%是水,其中配有可溶性的或不溶性的营养成分的培养基。

固体培养基:一类配制成的固体状态的基质。根据性质又分为固化培养基、非可逆性固化培养基、天然固态培养基、滤膜。

半固体培养基:指在液体培养基中加入少量的凝固剂而配制成的半固体状态的培养基。

脱水培养基:又称预制干燥培养基,指含有除水分外的一切成分的商品培养基。

特殊培养基:

1、选择性培养基:选择性培养基是指根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基。其功能是使混合菌样中的劣势菌变成优势菌,从而提高该菌的筛选效率。

2、酵母菌富集培养基:葡萄糖5%,尿素0.1%,硫化铵0.1%,磷酸二氢钾0.25%,磷酸氢二钠0.05%,七水合硫酸镁0.1%,七水合硫酸铁0.01%,酵母膏0.05%,孟加拉红0.003%,pH4.5。

3、Ashby无氮培养基:富集好氧自生固氮菌,甘露醇1%,磷酸二氢钾0.02%,七水合硫酸镁0.02%,氯化钠0.02%,二水合硫酸钙0.01%,碳酸钙0.5%。

培养基在使用前通过高压或过滤灭菌。防止污染应该注意以下事项:

1、确认工作细胞库是否被污染,确认毒种工作种子批是否被污染,确认所用培养基及其添加成分是否被污染,均可用细菌、真菌及支原体无菌试验来确认并排除。同时要对无菌试验培养基的灵敏度进行验证。实际生产中,可以从配制好的培养液中取少量加入营养琼脂于恒温培养箱内培养,48小时即可观察有无污染。

2、其它:高压灭菌设备、过滤除菌设备均应进行验证,确保灭菌和除菌效果;前者应在投产前及其后的每6个月进行验证,后者应在每次除菌前、后进行验证工作(至少应在除菌后进行一次)。

3、另外,应将有毒区与无毒区严格分开,并有各自独立的空气净化系统及孵室,有毒区对无毒区应保持相对负压,防止病毒对培养细胞(尤其是细胞库)的污染。

❺ 培养基要怎样配制

配制培养基前,要洗净备齐以下器具,主要包括不同型号的烧杯、容量瓶、移液管、滴管、玻棒、三角瓶以及培养基分装器等。

用于配制培养基的水最好是蒸馏水或无离子水,精细的试验须用重蒸馏水。化学药品应采用分析纯AR(二级)或化学纯CP(三级),以免杂质对培养物造成不利影响。药品的称量及定容要准确,不同化学药品的称量需使用不同的药匙,避免药品的交叉污染与混杂。

❻ 培养基怎么配置

(1)配制母液。把培养基m的必需元素按原配方量的50倍/100倍或1000倍称量后制成一种浓溶液,这种浓溶液叫母液在配制培养基时按比例分别量取母液稀释到所需的浓度即可母液配好后贴上标签,放在0~4℃的冰箱中可使用半年到1年,这样傲可节省许多时间可能产生化学反应的或溶解后产生沉淀的不能放在同一个容器m配制母液要用重蒸馏水药物要使用分析纯或等级较高的化学纯药物的称量和药液的定容都要准确。

母液①:硫酸镁18.5克.硝酸铵82.5克.硝酸钾95.0克;加水定容到1000毫升,浓度为培养基的50倍,配1升培养基时量取20毫升母液

母液②:氯化钙22.0克加水定容到500毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液

母液③:磷酸二氢钾8.5克加水定容到500毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液。

母液④;乙二胺四乙酸二钠3.73克硫酸亚铁2.78克,加水定容到1000毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液

母液⑤:硼酸620毫克,硫酸锰2230毫克,硫酸锌860毫克,硫酸铜2.5毫克,碘化钾83毫克,钼酸钠25毫克,氯化钴2.5毫克,加水定容到1000毫升,浓度为培养基的100信,配1升培养基时量取10毫升母液。

母液⑥:肌醇5克,甘氨酸100毫克,烟酸25毫克,盐酸吡哆醇25毫克,盐酸硫胺素5毫克,加水定容到500毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液

(2)配制培养基。配制每1000毫升培养基.称取6~10克琼:脂作凝固剂,具体按配方要求称量,放在水浴锅上慢慢溶解,先在量筒内放入一定量的水,按照母液顺序和规定量,量取母液,当母液加完后,根据需要每升培养基再加入生长调节物质如吲哚乙酸或萘乙酸等,细胞分裂素类0.04~10毫克,细胞分裂素应用最多的是6-苄基腺嘌呤,加完后倒入已熔化的琼脂中,每1000毫升培养基加入蔗糖30克或根据要求确定,定容到所需的体积,继续加温,直到琼脂完全熔解,用盐酸或氢氧化钠对培养基的pH进行调节,多数培养基的pH在5.4~6.0,MS培养基的pH为5.7。

将配好的培养基趁热倒入培养容器中,培养基占容器体积的1/4~1/3不要将培养基沾到容器壁上,否则容易被杂菌感染,然后及时加盖,进行高压灭菌,灭菌时要按高压灭菌锅的操作规程使用.在121℃、压力111千帕下维持15~20分钟,温度和时间都要严格控制,到时间后立即切断电源,当高压锅内压力降到常压后,开启放气阀,打开锅盖,取出灭菌好的培养基,放在接种室中培养3天,没被感染后才能用来组织培养

❼ 培养基的配制是怎么样的

1.培养基种类及成分

培养基根据其物理性状大致分成两类,即固体和液体培养基。在培养基中加入一定量的凝固剂(如琼脂、明胶等)即为固体培养基,而不加入凝固剂的即为液体培养基,具体运用上应视培养目的要求不同分别选择采用。

无论是固体还是液体培养基,其基本成分是类似的,一般可大致分为两个部分,即基本培养基如MS、B5、N6、Nitsh等和附加成分,如激素和天然附加物等,其基本成分如表1、表2。

表2 几种培养基附加成分表

2.培养基的配制

(1)母液的配制与保存 由于培养不同植物,需要配制不同的培养基。为了减少工作量,可先把药品配成母液(即浓缩液),一般扩大10~100倍,其中大量元素倍数略低,一般为10~20倍,微量元素和有机成分及铁盐等可扩大50~100倍。母液的配制及保存应注意以下几个方面:①药品称量应精确,尤其微量元素化合物应精确至0.0001克,大量元素化合物可精确至0.01克。②配制母液的浓度适当,倍数不宜过大,一是长时间保存后易沉淀,二是浓度大,用量就少,在配制培养基时易影响精确度。③母液贮藏也不宜过长,一般几个月左右,在配好的母液容器上应注明配制日期,以便定期检查,如出现浑浊、沉淀及霉菌等现象,就不能使用。④母液应在2~4℃的冰箱内保存。

(2)培养基的配制 首先要根据培养基配方,算好母液吸取量,并按顺序吸取,然后加入蔗糖溶液,并加入蒸馏水定容至所需体积,并用0.1~1摩尔/升的盐酸或氢氧化钠调整pH,加入琼脂加热溶化,配制好的培养基要趁热分注,倒入试管、三角瓶等培养器皿中,一般至容器1/4~1/5左右,最后加塞或封口准备消毒。

(3)培养基的消毒 由于培养基内有丰富营养物质,极利于细菌和真菌繁殖,造成污染,影响组培的成功,因此培养基消毒是必不可少的一个环节。一般采用高温高压消毒和过滤消毒两种方法。

高温高压消毒:一般用消毒锅消毒,把装有培养基的培养器皿先放入消毒篓中,再放入加有水的消毒锅内,注意容器不能装得过满,以免影响锅内蒸汽循环。装好后将锅盖拧紧,加热,并打开放气阀,待水煮沸后,放气3~5分钟排出锅内冷空气,即可关上放气阀并继续加热,使锅内保持108千帕压力、温度120℃左右,大约15~20分钟即可。

过滤消毒:一些易受高温破坏的培养基成分如引哚乙酸(IAA)、引哚丁酸(IBA)、玉米素(ZT)等,不宜用高温高压法消毒,则可用过滤消毒后加入至高温高压消毒的培养基中,过滤消毒可用细菌过滤消毒器,通过其中的0.45微米孔径的滤膜将直径较大的细菌等滤去,过滤消毒应在无菌室或超净工作台上进行,以避免污染培养基。

❽ 培养基的配制

1.配料:

配方换算→在容器中加入少量水(蒸馏水,自然水)→按照配方称取各种药品(依次加入)→加足所需水量。

2.溶解:

淀粉溶解:少量冷水调成糊状。加热溶解,边加热边搅拌以防止烧焦。

3.调PH:

用1N的盐酸或1N的NaOH把培养基调节到所要求的值。

4.过滤:

滤纸或棉花进行过滤。

5.分装:

一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。

6.包扎:

分装好后,塞上棉塞,在用牛皮纸将棉塞包裹好,防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。

7.灭菌:

按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌。如果灭菌的温度太高,营养成分会被破坏。

8.贮存:

培养基在30℃下放置一天,无污染的即可使用。一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用。


(8)培养基如何配置扩展阅读

培养基在使用前通过高压或过滤灭菌。防止污染应该注意以下事项:

确认工作细胞库是否被污染,确认毒种工作种子批是否被污染,确认所用培养基及其添加成分是否被污染,均可用细菌、真菌及支原体无菌试验来确认并排除。

同时要对无菌试验培养基的灵敏度进行验证。实际生产中,可以从配制好的培养液中取少量加入营养琼脂于恒温培养箱内培养,48小时即可观察有无污染。

将有毒区与无毒区严格分开,并有各自独立的空气净化系统及孵室,有毒区对无毒区应保持相对负压,防止病毒对培养细胞(尤其是细胞库)的污染。

参考资料

培养基-网络

❾ 配置培养基的原则有哪些

还是很多的。
培养基配制应遵循的原则
1、 根据不同微生物的营养需要配制不同的培养基。
2、 注意各种营养物质的浓度及合适配比,保持合适渗透压 。
3、 将培养基的 pH 控制在适宜的范围之内,以利于不同类型微生物的生长繁殖或代谢产物的积累。
4、 经济节约的原则。在所选培养基成分能满足微生物培养要求的前提下,尽可能选用价格低廉,资源丰富的材料作培养基成分。
5、控制氧化还原电位。对厌氧的微生物尤其重要。
6、培养基应无菌。故在培养基配制后应彻底杀死培养基中的杂菌 。

❿ 配置培养基的基本步骤有哪些应注意什么问题

快速制作斜面培养基方法
制作培养基斜面是制备菌种不可缺少的一步,传统的方法是将试管每10支为一组扎成一捆,高压灭菌后,一支一支地摆成斜面,操作比较烦琐,占用面积又多,造成诸多不便。我们在实践中摸索出一种简捷快速制备斜面培养基的方法,现介绍如下:
1.将胶合板截成长18厘米(与试管长度相等或略短)、宽9厘米(比并排5支试管直径的总和略窄)的小块备用。
2.在并排5支试管上面平置截好的胶合板,再在胶合板上面并排放5支试管,然后将试管的上、下端分别用牛皮纸包好,用线扎紧,使胶合板两侧的试管保持平行,置高压锅中灭菌。
3.高压灭菌后,经自然冷却,待气压降至零时,将高压锅的锅盖打开点,当棉塞水分充分蒸发后取出,不用拆捆,直接摆成斜面。大量制斜面时,既快捷又很少占用空间,非常方便,还便于保温,减缓凝结速度,充分吸收游离水分。
4.如需将斜面培养基保存一段时间,可在灭菌前将聚丙烯塑料袋套在试管外并扎紧袋口,灭菌后取出,直接摆成斜面,可防止水分蒸发。
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摘自于2003年第7期《农村实用科技》