⑴ 请问牛肉膏蛋白胨培养基如何配置
牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下:
牛肉膏 3g
蛋白胨 10g
NaCl 5g
琼脂 15—20g
水 1000ml
pH 7.4—7.6
三、器材
牛肉膏,蛋白胨, NaCl,琼脂;
1mol/L NaOH, 1mol/L HCl;
试管,三角烧瓶,烧杯,量筒,玻棒,培养基分装器,扭力天平,牛角匙,高压蒸汽灭菌锅,pH试纸( pH 5.5—9.0),棉花,牛皮纸,记号笔,麻绳,纱布等。
四、操作步骤
1.称量
按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑取,放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上,称量后直接放入水中,这时如稍微加热,牛肉膏便会与称量纸分离,然后立即取出纸片。蛋白胨很易吸潮,在称取时动作要迅速。另外,称药品时严防药品混杂,一把牛角匙用于一种药品,或称取一种药品后,洗净、擦干,再称取另一药品,瓶盖也不要盖错。
2.溶化
在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量,用玻棒搅匀,然后,在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后,补充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基,将称好的琼脂放入已溶化的药品中,再加热溶化,在琼脂溶化的过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。
3.调pH
在未调pH前,先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值,如果pH偏酸,用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸测其pH值,直至pH达7.6。反之,则用1mol/L HCl进行调节。注意pH值不要调过头,以避免回调,否则,将会影响培养基内各离子的浓度。
对于有些要求pH值较精确的微生物,其pH的调节可用酸度计进行(使用方法,可参考有关说明书)。
4.过滤
趁热用滤纸或多层纱布过滤,以利结果的观察。一般无特殊要求的情况下,这一步可以省去(本实验无需过滤)。
5.分装
按实验要求,可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。分装装置见图Ⅴ-1。
分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上,以免沾污棉塞而引起污染。
(1)液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。
(2)固体分装分装试管,其装量不超过管高的1/5,灭菌后制成斜面,如图Ⅴ-2。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。
(3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝。
6.加塞
培养基分装完毕后,在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞,以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染,并保证有良好的通气性能(棉塞制作方法附本实验后面)。
7.包扎
加塞后,将全部试管用麻绳捆扎好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、日期。三角烧瓶加塞后,外包牛皮纸,用麻绳以活结形式扎好,使用时容易解开,同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期。
8.灭菌
将上述培养基以1.05kg/cm2(15磅/英寸2),121.3℃, 20分钟高压蒸汽灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌,则应放入冰箱内暂存。
9.搁置斜面
将灭菌的试管培养基冷至50℃左右,将试管棉塞端搁在玻棒上,搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。
10.无菌检查
将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时,以检查灭菌是否彻底。
附:棉塞的制作
棉塞的作用有二:一是防止杂菌污染;二是保证通气良好。因此,棉塞质量的优劣对实验的结果有很大的影响。正确的棉塞要求形状、大小、松紧与试管口(或三角烧瓶口)完全适合,过紧则防碍空气流通,操作不便;过松则达不到滤菌的目的。加塞时,应使棉塞长度的1/3在试管口外,2/3在试管口内,如图Ⅴ-3。棉塞的制作过程如图Ⅴ-4。
此外,在微生物实验和科研中,常要用通气塞。所谓通气塞,就是几层纱布(一般为8层)相互重叠而成,或是在两层纱布间均匀铺一层棉花而成。这种通气塞通常加在装有液体培养基的三角烧瓶口上。经接种后,放在摇床上进行振荡培养,以获得良好通气促使菌体的生长或发酵。通气塞的形状
⑵ 怎样配制肉汤蛋白胨琼脂培养基
其配方如下:
蛋白胨10g 牛肉膏3g 氯化钠5g 蒸馏水1000mL 煮沸后调节Ph7.2-7.4 分装到三角瓶中
121℃高压灭菌15min。
⑶ 配置培养基时,为什么在分装前要调节PH至7.4~7.6
你所配置制是常用的牛肉膏蛋白胨培养基 一般情况下都是调节pH7.4~7.6
培养基的配制是根据你所要培养的东西的特性来配备的 并不是一成不变的 要想很好的培养一个品种 只有慢慢的探索 逐渐调节培养基 以便达到最好的培养状态
至于经典的培养基 比如你说的这个配方 适合很多的常见细菌的培养 在生物教学试验中经常用到 所以要求你们掌握 它的PH规定的就是这个范围
至于为什么在这个范围 就是因为在这个范围内 适合培养很多常见细菌
如果有需要 是可以超过这个范围调节PH的 比如需要某些细菌在PH不适应下产生的某些物质
⑷ 如何配置牛肉膏蛋白胨培养基来检测饮用水中的细菌数
按蛋白胨1%,氯化钠0.5%,牛肉膏0.3%的比例配置,调PH值至7.2-7.6后,加2%琼脂,121℃灭菌20分钟。
⑸ 牛肉膏蛋白胨经培养后pH值变碱性,如何控制pH在酸性范围,加过磷酸盐缓冲溶液 还是缓冲不住。。
首先你可以用ph更低的缓冲液试试,第二个问题要看你培养的具体细菌类别。原理上可以替代但是可能还是会变碱性。
⑹ 葡萄糖蛋白胨水如何配制
你是做生理生化实验吧。
配方应该是:0.5g蛋白胨,0.5g葡萄糖,0.2gK2HPO4,溶于100mL去离子水中,调pH7.2至7.2,分装试管,灭菌
⑺ 如何提高蛋白胨理化指标
蛋白胨检验规程
1、理化指标
pH测定:称取2.0g的干粉蛋白胨置于100mL的蒸馏水或去离子水中,加热完全溶解制成2%的溶液,测定其pH值,范围应在pH5.5~7.5;
可溶性:称取2g、10g的干粉蛋白胨,加入到100mL蒸馏水或去离子水中配制成2%、10%
的溶液,溶液应澄清透明,无沉淀,颜色判断分无色、微黄、浅黄、黄色、深黄、
棕色。
2、生化指标
糖发酵试验:称取胨2.0g、NaCL 0.5g、酚红0.002g、蒸馏水或去离子水100ml,配制溶液,调节其pH值7.2~7.4,以每管6.0ml分装,115℃/15min高压灭菌,接种大肠埃希氏杆菌的18~24h的新鲜培养物,35±2℃培养18~24h观察结果,应为阴性,即培养基颜色应为橙红色。培养基颜色变成黄色报告阳性。
H2S试验:称取胨1.0g,加100ml的蒸馏水或去离子水配制成1.0%的胨水,以每管6ml分
装,121℃/15min高压灭菌,接种伤寒沙门氏菌的18~24h的新鲜培养物,将PbAc
试纸插入试管中,试纸下段距离液面2~3cm,盖好试管盖。30~35℃培养24~48h,
观察结果,PbAc试纸条的黑色域不得小于0.5cm。
靛基质(吲哚)试验:称取胨1.0g,加100ml的蒸馏水或去离子水配制成1.0%的胨水,以每管6ml分装,121℃/15min高压灭菌,分别接种大肠埃希氏杆菌、伤寒沙门氏菌的18~24h的新鲜培养物,35±2℃培养18~24h。观察结果时每管加入4~5滴入靛基质试剂,大肠埃希氏杆菌应为阳性,10s内液面上出现玫瑰红色环,伤寒沙门氏菌呈阴性。
V-P试验:称取胨0.7g、葡萄糖0.5g、NaCl 0.5g,加100ml蒸馏水或去离子水配制溶液,
调节其pH7.2~7.4,以每管6ml分装115℃/15min高压灭菌,分别接种产气肠杆菌(如45103)、大肠埃希氏杆菌(如44104)的18~24h的新鲜培养物,35±2℃培养18~24h。观察结果时,除去试管帽,依次加入VP试剂甲、乙液, 甲乙液比例:3/1,加入的量甲液9滴,乙液3滴;之后放置36℃培养箱孵育,30min内接种产气肠杆菌的管中出现红色的为阳性反应,大肠杆菌的呈阴性反应。
生长试验:配制培养基:2.0g胨、0.5gNaCl、1.5g的琼脂,加入到100mL蒸馏水或去离子水中,加热完全溶解,调节pH值7.2~7.4,121℃/15min高压灭菌,待温度降到50℃左右时倾注平板,接种100~1000cfu/ml的金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏杆菌,35±2℃培养18~24h观察结果,应生长良好。接种的金黄色葡萄球菌和大肠杆菌是通过比浊的方法稀释到-7和-8,接种量为1ml,每个稀释度需作两块平板,要求-7平板上生长菌落100左右。
色素试验:配制培养基:2.0g胨、0.5gNaCl、1.5g的琼脂, 加入到100mL蒸馏水或去离子水中,加热完全溶解,调节pH值7.2~7.4,121℃/15min高压灭菌,待温度降到50℃左右时倾注平板, 充分凝固后,划线(四区划线接种的方式)接种金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞杆菌的新鲜培养物,35±2℃培养18~24h观察结果,均应四区均生长,接种金黄色葡萄球菌的平板上有黄色色素生成,接种铜绿假单胞杆菌的平板上有绿色色素生成。
实验要严格按操作进行,掌握要点,积累经验,没有约定俗成的,要有自己的一套,
⑻ 配置牛肉膏蛋白胨培养基什么时候调节ph
严格要求PH的情况下,应该在溶解完全并让溶液处于室温时调节PH至恰当范围。但实际上配置培养基并不需要如此严格,只需要在配置前将配置用水调节至合适PH范围就可以了。
⑼ 中国药典中pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液如何配制
取磷酸氢二钾3.56g,磷酸氢二钠7.23g,氯化钠4.30g,蛋白胨1.0g加纯化水1000ml溶解,灭菌即可
⑽ 牛肉膏蛋白胨培养基配方是什么
牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下:牛肉膏3g。蛋白胨10g。NaCl 5g。琼脂15—20g。水1000ml。pH 7.4—7.6。
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基是一种应用十分广泛的天然培养基,其中的牛肉膏为微生物提供碳源、磷酸盐和维生素,蛋白胨主要提供氮源和维生素,NaCl提供无机盐。步骤称量,按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。
牛肉膏蛋白胨培养基步骤
称量
按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑取,放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上,称量后直接放入水中,这时如稍微加热,牛肉膏便会与称量纸分离,然后立即取出纸片。
溶化
在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量,用玻棒搅匀,然后,在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后,补充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基,将称好的琼脂放入已溶化的药品中,再加热溶化,在琼脂溶化的过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底使烧杯破裂。
调pH
在未调pH前,先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值,如果pH偏酸,用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸测其pH值,直至pH达7.6。反之,则用1mol/L HCl进行调节。注意pH值不要调过头,以避免回调,否则,将会影响培养基内各离子的浓度。
以上内容参考:网络——牛肉膏蛋白胨琼脂培养基