① 提DNA用的1%SDS-PK(蛋白酶K)如何配置
50MMOL/L TRIS-CL(PH8.0)和1.5MMOL/L乙酸钙,高压灭菌后,该混合溶液配制成含蛋白酶K浓度为20MG/ML的溶液,将配制的蛋白酶K溶液-20度保存.
② 大概配成多少mg/ml的,蛋白酶K也是粉末状的,怎么配呢
一般先低速离心将粉末甩在管底部 加入2.5mL去离子水浓度就是20mg/ml,具体浓度看你的实验要求,操作时戴口罩 对皮肤黏膜有损伤,希望对你有帮组。
③ 蛋白酶k的保存方法
保存:保存在-20℃冰箱里,避免反复冻融,有效保证12月。
孵育温度为55至65℃,理想孵育温度为58℃,孵育时间为15分钟至48小时;理想孵育时间为2小时。
④ 蛋白酶k是从哪里得到的
蛋白酶k是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶,从林伯氏白色念球菌中纯化得到。该酶有两个Ca2+结合位点,它们离酶的活性中心有一定距离,与催化机理并无直接关系。然而,如果从该酶中除去Ca2+,由于出现远程的结构变化,催化活性将丧失80%左右,但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酶制品的蛋白质。所以,蛋白酶k消化过程中通常加入edta(以抑制依赖于mg2+的核酸酶的作用)。但是,如果要消化对蛋白酶k具有较强耐性的蛋白,如角蛋白一类,则可能需要使用含有1mmol/lCa2+而不含edta的缓冲液。在消化完毕后、纯化核酸前要加入egt(ph8.0)至终浓度为2mmol/l,以鳌合Ca2+。
⑤ 蛋白酶K 600mAU/ml 怎么配
AU是活力单位,这个和100mg之间没有直接联系,但是产品说明书上应该是写出来每毫克蛋白有多少活力单位,否则是没法配制的。
⑥ 我做的TUNEL,说明书上说是要20ug/ml的蛋白酶k,我买来的蛋白酶K是20mg/ml的不知道怎么稀释
1mg=1000ug,这个浓度不用稀释了,用的时候1ml反应体系中加1ul就可以了,终浓度为20ug/ml。蛋白酶k分不分装应该都可以,因为保存温度是-20℃,是液态的,用的时候不需要融解,所以直接拿出来用就可以了。保存时间应该挺长的,具体看说明书。good luck!
⑦ 蛋白酶K溶液怎么配制
蛋白酶K溶液怎么配制
蛋白酶,顾名思义,降解蛋白的酶,是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键,用于生物样品中蛋白质的一般降解。 在RNA提取中,蛋白酶k的作用主要是降解RNA酶,防止RNA的降解。
蛋白酶K广泛应用于分子生物学,药理学等科研方面。一种非特异性、枯草杆菌蛋白酶相关的丝氨酸蛋白酶,具有很高的比活性。一般储存在-20°C,避光防潮密闭干燥 蛋白酶是所有能够催化分解蛋白质的酶类的统称
⑧ 蛋白酶k、胰蛋白酶水解蛋白质方法步骤
没步奏