1. 制作浓缩胶和分离胶时可能会出现不凝固的现象,通常原因有
摘要 ，因为 浓缩胶的ACRBIS 的量明显少于分离胶，出现胶不凝的现象个人 认为可能有几种可能：
2. 电泳浓缩胶浓度怎么选取
浓缩胶一般都是5%的，下面的是5ML的配方，其余的你可以自己算了
5ml
H2O 3.6
acrylamide mix（30%） 0.62
1M Tris(PH6.8) 0.63
10% SDS 0.05
10% AP 0.05
TEMED 0.005
3. 浓缩胶的配制方法
一般同工酶可选择7?5%～10%的胶(过氧化物酶和酯酶7?5%较合适，超氧化物歧化酶用10%，可溶性蛋白可根据需要配制)。将配制好的凝胶液置真空干燥器中，抽气10Min，再加入TEMED15μl；混匀后用一细玻棒引流，沿无凹槽的玻板缓缓注入胶室中，注胶过程要防止气泡产生。胶液加到离凹槽3CM处为止，立即用注射器轻轻在胶溶液上面铺1CM高的水层，但不要扰乱丙烯酰胺胶面。待分离胶和水层之间出现清晰的界面时，表示聚合已完成。用注射器小心吸出上层覆盖水，按表5－1配制好浓缩胶，抽气后加入5μlTEMED，混合后加到分离胶上层，插入预先选择好的样品梳，注意不要带入气泡。
4. SDS-PAGE凝胶制实验及其各实验试剂的配制方法
SDS-PAGE凝胶制备属于实验室最常规的操作了，刚开始做蛋白实验总是在找凝胶配制实验中所用试剂的配方，这里总结了分离胶、浓缩胶、分离胶和浓缩胶缓冲液、考马斯亮蓝染液、样品缓冲液、电泳缓冲液等配方。
1.
分离胶(12%)
配制
所需试剂
所需体积
分离胶(12％)
30％丙烯酰胺
6.0
ml
1.5
mol/l
Tris-HCl
3.8
ml
10%SDS
150
μl
10%过硫酸铵
150
μl
TEMED
6
μl
蒸馏水
4.9
ml
2.
浓缩胶(5%)
配制
所需试剂
所需体积
浓缩胶(5％)
30％丙烯酰胺
1.3
ml
1.5
mol/l
Tris-HCl
1.0
ml
10%SDS
80
μl
10%过硫酸铵
80
μl
TEMED
8
μl
蒸馏水
5.5
ml
3.
分离胶缓冲液(pH8.9)
配制
所需试剂
所需体积
分离胶缓冲液
Tris
36.6
g
1
mol/l
HCl
48
ml
蒸馏水
补足至100
ml
4.
浓缩胶缓冲液(pH6.7)
配制
所需试剂
所需体积
浓缩胶缓冲液（pH6.7）
Tris
5.98
g
1
mol/l
HCl
48
ml
蒸馏水
补足至100
ml
5.
30%丙烯酰胺(pH≤7.0)
配制
所需试剂
所需体积
30%丙烯酰胺（pH≤7.0）
丙烯酰胺
29
g
甲叉-双丙烯酰胺
1
g
蒸馏水
补足至100
ml
6.
10%过硫酸铵(W/V)：1g过硫酸铵溶于10ml水中，4℃保存数周，尽量现用现配。
7.
10%SDS：将10
g
SDS溶于80ml重蒸水中并轻缓搅拌(室温低时需水浴加热溶解)，再定容至100ml，室温存放。
8.
样品缓冲液
配制
所需试剂
所需体积
样品缓冲液
1
M
Tris-HCl（pH6.7）
5
ml
SDS
2.5
g
巯基乙醇
1
ml
溴酚兰
0.05
g
蔗糖
10
g
蒸馏水
补足至100ml
9.
考马斯亮蓝染色液：0.25g考马斯亮蓝R-250用少量甲醇溶解后，用甲醇(40ml)-乙酸(10ml)水溶液稀释至100ml。
10.
Tris-甘氨酸电泳缓冲液(pH8.3)
配制
所需试剂
所需体积
Tris-甘氨酸
电泳缓冲液（pH8.3）
Tris碱
15.1
g
甘氨酸
94
g
10％（W/V）SDS
50
ml
去离子水
补足至100
ml
凝胶配制所需试剂的母液不能放置太久，有条件的实验室可将母液保存在4度冰箱中，放置母液被微生物污染或者出现沉淀。
5. 求SDS-PAGE 配方 分离胶 7.5% 浓缩胶 4%
5ml 7.5%分离胶：
H2O 2.35ml
30%丙烯酰胺溶液 1.25ml
1.5M Tris(pH8.8) 1.3ml
10%SDS 50ul
10%APS 50ul
TEMED 4ul
5ml 4%浓缩胶：
H2O 3ml
30%丙烯酰胺溶液 670ul
0.5M Tris(pH6.8) 1.25ml
10%SDS 50ul
10%APS 50ul
TEMED 4ul
6. 4✘tris-sds buffer ph8.8
在SDS－PAGE不连续电泳中,制胶缓冲液使用的是Tris－HCL缓冲系统,浓缩胶是pH6.7,分离胶pH8.9；而电泳缓冲液使用的Tris－甘氨酸缓冲系统.在浓缩胶中,其pH环境呈弱酸性,因此甘氨酸解离很少,其在电场的作用下,泳动效率低；而CL离子却很高,两者之间形成导电性较低的区带,蛋白分子就介于二者之间泳动.由于导电性与电场强度成反比,这一区带便形成了较高的电压剃度,压着蛋白质分子聚集到一起,浓缩为一狭窄的区带.当样品进入分离胶后,由于胶中pH的增加,呈碱性,甘氨酸大量解离,泳动速率增加,直接紧随氯离子之后,同时由于分离胶孔径的缩小,在电场的作用下,蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离.
7. 索莱宝4xsdspage浓缩胶缓冲液怎么配置
本试剂是由 Tris 和 SDS 混合而成的，主要用于 SDS-PAGE 凝胶（变性聚丙烯酰胺凝胶）制备实验。配制浓缩胶时，10ml 制胶体系中加入 2.5ml（4 倍稀释） 。
组分 浓度
Tris-HCl（pH=6.8） 0.5mol/L
SDS 0.4%（W/V）
注意事项：若有白色沉淀析出，可置于 37℃水浴，析出溶解后再使用。
8. 做western blot，怎样根据分子量的不同配置不同浓度的浓缩胶
10%、12%的分离胶都可以
9. 样品层在浓缩胶中为什么能得到浓缩
样品层在浓缩胶中能得到浓缩是因为：浓缩胶的作用是有堆积作用，凝胶浓度较小，孔径较大，把较稀的样品加在浓缩胶上，经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。
当样品液和浓缩胶选pH6.8的TRIS/HCL缓冲液，电极液选TRIS/甘氨酸。电泳开始后，HCL解离成氯离子，甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。蛋白质带负电荷，因此一起向正极移动，其中氯离子最快，甘氨酸根离子最慢，蛋白居中。
浓缩叫的配置方式
一般同工酶可选择7.5%～10%的胶(过氧化物酶和酯酶7.5%较合适，超氧化物歧化酶用10%，可溶性蛋白可根据需要配制)。将配制好的凝胶液置真空干燥器中，抽气10Min，再加入TEMED15μl；混匀后用一细玻棒引流，沿无凹槽的玻板缓缓注入胶室中，注胶过程要防止气泡产生。
胶液加到离凹槽3CM处为止，立即用注射器轻轻在胶溶液上面铺1CM高的水层，但不要扰乱丙烯酰胺胶面。待分离胶和水层之间出现清晰的界面时，表示聚合已完成。
用注射器小心吸出上层覆盖水，按表5－1配制好浓缩胶，抽气后加入5μlTEMED，混合后加到分离胶上层，插入预先选择好的样品梳，注意不要带入气泡。