‘壹’ 无血清细胞培养基是怎么出现的
无血清细胞培养基是怎么出现的
目前，血清仍是动物细胞培养中最基本的的添加物，尤其是在原代培养或者细胞生长状况不良时，常常会先使用有血清的培养液进行培养，待细胞生长旺盛以后，再换成无血清培养液。细胞转入无血清培养基培养要有一个适应过程，一般要逐步降低血清浓度，从10%减少到5%，3%，1%，直至无血清培养。在降低过程中要注意观察细胞形态是否发生变化，是否有部分细胞死亡，存活细胞是否还保持原有的功能和生物学特性等。在实验后这些细胞一般不再继续保留，很少有细胞能够长期培养于无血清培养基而不发生改变的。细胞转入无血清培养之前，要留有种子细胞，种子细胞按常规培养于含血清的培养基中，以保证细胞的特性不发生变化。
为了使细胞适应无血清培养，关键的是使所培养细胞：
1.处于对数生长中期
2.>90%
活细胞率
3.适应时以较高的起始细胞接种
细胞适应无血清培养基的方法
1.直接适应——细胞从添加血清的培养基转换到无血清培养基（SFM）中。
一些类型细胞可直接从包含血清的培养基适应无血清培养基。对于直接适应，接种细胞密度应该:2.5×10~3.5×10细胞/ml。当细胞密度达到1×10~3×10细胞/ml时，传代培养细胞。当细胞密度在培养4到7天后达到2×10~4×10细胞/ml时，细胞完全适应了无血清培养基。每隔3~5天，当细胞密度达到1×10~3×10细胞/ml，细胞活率在90%时，贮备的适应了无血清培养基的细胞培养物应该再次传代培养。
2.连续适应——分好几步把细胞从添加血清的培养基转换到无血清培养基（SFM）中，与直接适应相比较，连续适应趋向对于细胞更加温和一些。
（1）以2倍正常接种密度接种生长活跃的细胞培养物到75%有血清培养基：25%SFM
混合培养基中，传代培养。
（2）当细胞密度>5×10细胞/ml时，以2×10到3×10细胞/ml细胞密度，在有血清培养基：SFM为50∶50的混合培养基中传代培养。
（3）以2×10到3×10细胞/ml细胞密度，25%有血清培养基和75%
SFM中传代培养。
（4）当细胞密度达到1×10到3×10细胞/ml（接种后4到6天），在100%SFM培养基中传代培养。
（5）每隔3到5天，当细胞密度达到1×10到3×10细胞/ml，细胞活率在90%时，贮备的适应了无血清培养基的细胞培养物应该再次传代培养。
建议备份前一次混合培养的培养物，直到每一次细胞适应了新的混合培养基。每一次减少血清前，可能需要在SFM/有血清混合培养基中进行几次传代。
在适应过程中，最好不要让细胞生长过度。这将增加选择亚群的可能性。需要注意，与有血清培养基相比，大部分SFM包含非常少的蛋白质，因而更易于受外界因素的影响。
细胞培养适应替代血清：许多细胞利用连续适应方法能很好的适应，用包含FBS的的培养基和包含有替代血清的培养基1∶1（v∶v）的混合培养基培养细胞。通过下列的混合培养基的方式，连续几代减少当前培养基的量：1∶2，1∶4，1∶16和100%替代培养基。每次适应改变血清比例时，传代细胞2到3次。
培养可以直接从FBS转换到替代血清。一开始就使用相同于FBS的浓度的替代物或血清，生长的延迟可能会发生，4允许进行2到3次的传代，使生长率恢复到以前的水平。
特别需要强调的是：配制无血清培养液必须使用高质量的水，如石英玻璃蒸馏器经三次蒸馏或超纯水净化装置制备的水。因为无血清培养基缺乏了血清中天然成分中和毒素、保护细胞的大分子，既便水中的有毒物质含量甚微，也可能对细胞产生致死性损害。这是无血清培养能否成功的关键因素之一。
‘贰’ 求助，有人用无血清培养基养细胞吗
无血清培养基是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。无血清培养基的基本配方为基础培养基及添加组分两大部分。 无血清培养基可避免血清批次间的差异影响，提高细胞培养和实验结果的重复性，减少血清对细胞的毒性作用和血清源性污染，减少了血清中蛋白对某些生物测定的干扰，便于对实验结果的分析。基于无血清培养基以上的优势，ScienCell实验室根据不同细胞的生长特性研发了不同种类的无血清培养基。ScienCell无血清培养基列表如下：
1111 SMCM-sf 平滑肌细胞培养基
1511 NPrCM 神经前体细胞培养基
1521 NM 神经细胞培养基
1601 OPCM 少突胶质前体细胞培养基
1611 OsM 球状少突细胞培养基
2101 KM 角质细胞培养基
2111 KM-d 角质细胞培养基（确定）
2311 FM-sf 成纤维细胞培养基
2561 TEpiCM 扁桃体上皮细胞培养基
2611 OKM 口腔角质细胞培养基
2951 CoEpiCM 结肠上皮细胞培养基
3211 BEpiCM 支气管上皮细胞培养基
3231 SAEpiCM 小气管上皮细胞培养基
4121 EpiCM-2 上皮细胞培养基-2
4321 UCM 尿道上皮细胞培养基
4411 PEpiCM 前列腺上皮细胞培养基
5501 HemGM 造血细胞培养基
5801 STEMium 人胚胎干细胞无血清培养基
5811 STEMium-XF 无异种人胚胎干细胞生长培养基
5881 MEF-cm 小鼠胚胎成纤维细胞培养基
5891 bFGF-std MEF-cm 碱性成纤维细胞生长因子刺激的小鼠胚胎成纤维细胞条件培养基
5911 CSM 心肌细胞选择性培养基
5931 PSCNIM 多功能干细胞神经诱导培养基
6511 CEpiCM 角膜上皮细胞培养基
7311 OEpiCM 卵巢上皮细胞培养基
7511 MSCM-sf 间充质干细胞培养基
7611 MEpiCM 乳腺上皮细胞培养基
细胞转入无血清培养基培养要有一个适应过程，一般要逐步降低血清浓度，直至无血清培养。在降低过程中要注意观察细胞形态是否发生变化，是否有部分细胞死亡，存活细胞是否还保持原有的功能和生物学特性等。
ScienCell无血清培养基，是经灭菌的液体培养基，包含必需和非必需氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质。每套包含500毫升基础液，5毫升细胞生长添加物，5毫升双抗，混匀后即为完全培养基。每一款专用培养基均搭配特定类型的细胞生长添加物成分，为细胞的传代和生长提供最佳环境。
‘叁’ 求助，无血清培养基如何让细胞贴壁
无血清培养基如何让细胞贴壁
细胞培养不用血清，冻存可以用无血清冻存液 配方为细胞条件无血清培养基与含10%二甲基亚砜的新鲜的无血清培养基1比1混匀 冻存过程： 消化贴壁细胞或收集悬浮细胞，将细胞悬液收集至离心管并1000rpm离心10分钟，弃上清液 用一定量冻存液将细胞重悬，计数并调整细胞密度至100个每毫升左右 将细胞悬液分装至2ml冻存管中，每管1ml并将冻存管口封，贴上标签做好记录 降温： 4度1小时，负20度1小时，负80度18小时或隔夜，液氮
‘肆’ 无血清培养基配方，无血清细胞培养基，什么是无血清
在培养动物细胞的时候培养基中加入血清，是因为血清成分复杂，含有的一些动物细胞生长必须的物质成分尚未完全解读。无血清则意味着用更清晰的物质配方来制作培养基，成分是完全明确的。
‘伍’ 我的细胞培养不用血清，冻存要怎么样
细胞培养不用血清，冻存可以用无血清冻存液
配方为细胞条件无血清培养基与含10%二甲基亚砜的新鲜的无血清培养基1比1混匀
冻存过程：
消化贴壁细胞或收集悬浮细胞，将细胞悬液收集至离心管并1000rpm离心10分钟，弃上清液
用一定量冻存液将细胞重悬，计数并调整细胞密度至100个每毫升左右
将细胞悬液分装至2ml冻存管中，每管1ml并将冻存管口封，贴上标签做好记录
降温：
4度1小时，负20度1小时，负80度18小时或隔夜，液氮
‘陆’ 无血清培养基有什么优缺点，主要在哪些方面应用
优点：
①提高了细胞培养的可重复性，避免了由于血清批次之间差异的影响，
②减少了由血清带来病毒、真菌和支原体等微生物污染的危险，
③供应充足、稳定，
④细胞产品易于纯化，
⑤避免了血清中某些因素对有些细胞的毒性，⑥减少了血清中蛋白对某些生物测定的干扰，便于对实验结果的分析。
缺点：
①细胞在无血清培养基中易受某些机械因素和化学因素的影响，培养基的保存和应用不如传统的合成培养基方便，
②成本较高，
③针对性强，一种无血清培养基仅适合某一类细胞的培养。
应用于蛋白生产用细胞的培养